PGD：全基因组编辑的深度解析与应用解析：探索其控制基因变异精准塑造新种质的关键因素深度挖掘的内幕，真相犹在眼前，凭什么忽略？，影响广泛的决策，未来能否吸取过去的教训？
假设标题为《PGD：全基因组编辑之深度解析及其在新种质构建中的关键作用》
PGD（全基因组编辑）作为一项前沿的生物技术，以其强大的基因工程能力，改变了传统育种方式，致力于通过精确的基因修改来培育具有特定遗传特征的新物种。从20世纪60年代的克隆羊“多莉”到近年来的人工种子工程、作物耐逆性研究等领域的广泛应用，PGD正逐渐成为未来新种质构建的关键工具。
PGD的核心思想是通过设计和构建能够对特定基因进行修饰或删除的DNA片段，以实现对生物体生长发育过程中的基因调控目标。这种基因编辑技术具有显著的灵活性和针对性，可以针对多种遗传障碍进行治疗和改良，从而培育出更健康、适应性强的新种质。PGD分为两种主要类型：CRISPR-Cas9系统和TALENs（限制性核酸内切酶-末端转移酶）。以下我们将详细介绍这两种方法在新种质构建过程中的关键作用。
1. CRISPR-Cas9系统
CRISPR-Cas9系统是一种广泛应用于PGD的技术平台，它利用TaqMan或Cas9蛋白对DNA序列进行切割，并引导Cas9沿着特定的切割位点插入或删除特定基因。这种方法的优点在于操作简便，不需要额外的蛋白质修饰和激活步骤，且能够准确地定位并修改基因的位置。例如，在植物细胞中，研究人员可以通过构建含有剪切位点的引物，将Cas9引导至特定基因的位置，然后用磷酸二酯键连接剪切位点到目标基因上，形成一个双链反向互补的DNA片段。研究人员将这条带有目的基因的DNA片段引入植物细胞，让Cas9在该位置切割DNA，实现对目标基因的精确编辑。通过这种方式，他们可以在不破坏其他基因的前提下，精确地改变植物细胞内的基因表达模式，进而培育出具有特定遗传特征的新种质。
2. TALENs
TALENs，即限制性核酸内切酶-末端转移酶，是一种基于酶切机制的基因编辑技术。这类技术在构建新型种质时尤其有优势，因为它们能够精确地选择和切割特定类型的DNA序列，而且对基因间的相互作用无影响。例如，科学家们可以使用TALOs，如ZFNs（锌指核酸酶）、TAIRs（TAI-RNA），构建一个靶向特定转录因子（TF）的序列特异性TALOS识别序列和结合位点。当TALOS与特定TF结合后，能够激发TF进入肿瘤细胞，启动其下游信号通路，导致肿瘤细胞失控增殖并转化为癌细胞。研究人员通过设计和构建这样的TALOS序列，可以选择和切割特定类型的基因，从而实现对癌症细胞基因表达的精细调控，从而培育出具有抑制肿瘤生长、提升免疫功能等特性的新种质。
PGD在新种质构建过程中起着至关重要的作用。通过精确地控制基因变异，PGD能够实现对生物体各种基因的选择性和干扰性编辑，从而达到改善个体生物学特性的目标。特别是在植物育种领域，由于PGD能够直接对植物特定基因进行干预，因此对于解决一些已知的遗传病、抗逆性提高和高效繁殖等方面具有显著的应用潜力。随着CRISPR-Cas9和TALENs等新型基因编辑技术的不断成熟和完善，PGD在新种质构建中的应用将会更加广泛，为我们揭示更多生命科学的秘密提供了可能性。
（来源：金石杂谈）
转自：金石杂谈
6月12日，近期打车出行股曹操出行通过港交所聆讯，此前两次冲击未果。公司联席保荐人为华泰国际、农银国际、广发证券（香港）。公开资料显示，曹操出行成立于2015年，是吉利控股集团布局“新能源汽车共享生态”的战略性投资业务。据悉，这是李书福的第10个IPO。不知本次上市，又能否赢得资本市场认可？
1）市占率第二，不过占比只有5.4%。曹操出行，是吉利孵化的网约车平台，在136个城市运营，2023年总交易价值122亿，较2022年增长37.5%，2024年达到170亿。市占率方面，曹操出行中国第二，市占率5.4%；第一则是滴滴，市占率高达70.4%，曾一度占据9成市场份额。
具体数据来看，公司2024年月活用户有2870万，远超过去两年；司机每小时收入35.7元，按10个小时计，一月收入万元不是梦。
2）依然处于烧钱状态，2022年至24年分别亏损19.72亿、19.16亿以及12.51亿，三年亏损51.39亿。收入来看，分别实现76.31亿、106.68亿以及146.57亿；但是毛利率实在太低了，2022年还是负-4.4%，2024年增至8.1%，如此惨淡的毛利率想盈利属实比较难。
3）现金流恶化。我们再看公司的现金流，经营现金流从22年-11.27亿转为2023年正1.36亿和2024年2.36亿；最惨的则是2024年的融资活动，不仅没融到钱还大幅流出6.82亿，导致公司现金流有所恶化，2024年现金大幅减少4.23亿。2022年至24年，现金分别为3.8亿、5.83亿，到了24年大幅缩水至1.59亿。
4）现金流虽然恶化，但负债率却居高不下，2024年负债率高达177%，用借款续命，融资停滞已4年。
不同于其它上市新股基本通过股权融资来筹集资金，曹操出行则是股权融资不畅，大部分资金来自债务融资。2022年至2024年，公司短期债务及长期债务的短期部分分别为35亿、52亿和57亿
而且公司大量借款依靠吉利集团担保，2022年至2024年吉利担保的资产支持证券、银行借款等合计53亿、72亿以及63亿。由于大量的银行借款，曹操出行仅每年支付给银行的利息就超过了3个亿。
5）公司实控人为吉利董事长李书福。截至目前，李书福父子直接持有69.93%，吉利控股持股13.94%，吉利系控制83.87%的股份；此外，相城相行创投持股7.45%，三川基金持股4.28%，农银投资（苏州）持股1.6%，天堂硅谷天晟持股1.3%，隆启星路持股0.65%，东吴创新持股0.53%，桐乡乌镇一号基金持股0.33%。
公司上市前共进行了三轮融资，2017年10月进行了A轮融资，交易前估值96.42亿，筹资1亿美元，成本30.75元；2017年12月A1轮融资3.5亿，交易前估值103亿，成本30.76元；2021年8月进行了B轮融资，融资18亿，交易前估值170亿，成本37.6元。如果上市，上市前投资者股份禁售半年。
其中，三川基金管理人为香港三川资本，农银投资则是中国农业银行旗下公司，东吴创新是东吴证券的全资子公司，桐乡乌镇1号基金则隶属于桐乡市财政局。
以东吴创新为例，他参与了B轮融资，持股2659500股，投资1个亿；桐乡财政局则在A1轮持股1625500股，投资额5000万；三川基金投资了A轮，21403500股对应投资额6582万元。
综上，曹操出行已经有4年未能迎来新的投资者，而投资方也没有知名资本，只能寄希望于基石投资来些顶级资本，否则很难受到资本青睐；最为严重的是，公司既非网约车龙头，也未能实现盈利，且3年亏损50亿，负债率高达177%，借款续命，未来在港股市场很可能会步履维艰。